การตัดต่อยีนและเปรียบเทียบการตัดต่อยีนและเปรียบเทียบความสามารถในการละลายของ Plasmepsin I ที่ผ่านการตัดต่อยีน เข้ากับGreen Fluorescence Protien กับ Plasmepsin Iที่ไม่ได้รับการตัดต่อยีนความสามารถในการละ ...
Plasmepsin I (PM I) เป็นโปรติเอสเอ็นไซม์ชนิดหนึ่งของซึ่งมีความสำคัญต่อการดำรงชีวิตของเชื้อมาลาเรียเนื่องจาก PMI มีหน้าที่สลายฮีโมโกลบินในเม็ดเลือดแดงเพื่อเป็นนำมาเป็นอาหารและใช้ในกระบวนการ metabolism ของเชื้อมาลาเรีย ดังนั้น PM I จึงเป็นโปรตีนที่เป็นเป้าหมายที่น่าสนใจของยารักษามาลาเรีย และโครงสร้างสามมิติของ PMI จะเป็นเครื่องมือที่สำคัญในการออกแบบยา จากการศึกษาเบื้องต้นพบว่าการผลิต PMI ในแบคทีเรียชนิดอีโคไล (E.coli) จะได้โปรตีนในปริมาณมาก แต่มีความสามารถในการละลายตำ จึงได้โปรตีนที่อยู่ในรูป inclusion body ซึ่งยากต่อการทำให้บริสุทธ์เพื่อนำมาศึกษาคุณสมบัติต่อไป ในการศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อที่จะปรับปรุงความสามารถในการละลายของ PMI โดยนำยีนของโปรตีน PMI ต่อเข้ากับยีน Green Fluorescence Protien (GFP) เนื่องจากมีรายงานว่า GFP เป็นโปรตีนที่มีความสามารถในการละลายดี จึงอาจมีส่วนช่วยเพิ่มประสิทธิภาพในการปรับปรุงความสามารถในการละลายของโปรตีน PM I และนอกจากนั้นยังสามารถใช้แสงสีเขียวของ GFP เป็นเครื่องตรวจสอบการแสดงออกของ PMI ได้ ขอบเขตของการศึกษาเริ่มจากการโคลนยีน PMI โดยวิธี PCR และนำยีน PMI ที่ได้มาต่อเข้ากับยีน GFP ที่อยู่ในพลาสมิต pET17b เมื่อได้โคลน PMI-GFP ที่ต้องการแล้ว จึงได้นำไปแสดงออกในเซลล์อีโคไลชนิด BL-21 และทำการเปรียบเทียบความสามารถในการละลายของ PMI สายพันธุ์เดิมกับสายพันธุ์ที่ได้รับการตัดต่อโดยใช้ SDS-PAGE เมื่อเปรียบเทียบสัดส่วนของ PMI ทั้งสองชนิดที่ถูกสร้างในส่วนที่ละลายน้ำได้ในเซลล์ (soluble fraction)แล้ว พบว่า GFP ช่วยให้ประสิทธิภาดการละลายของ PMI เพิ่มขึ้นจาก 1% เป็น 6% และทำให้ผลิตผลของโปรตีนเพิ่มขึ้นอีกด้วย
-
4957 การตัดต่อยีนและเปรียบเทียบการตัดต่อยีนและเปรียบเทียบความสามารถในการละลายของ Plasmepsin I ที่ผ่านการตัดต่อยีน เข้ากับGreen Fluorescence Protien กับ Plasmepsin Iที่ไม่ได้รับการตัดต่อยีนความสามารถในการละลายของ Plasmepsin I ที่ผ่านการตัดต่เข้ากับGreen Fluores /index.php/project-all/item/4957-plasmepsin-i-green-fluorescence-protien-plasmepsin-i-plasmepsin-i-green-fluoresเพิ่มในรายการโปรด